ارزیابی پروتئین نوترکیب nc1gra7 در تشخیص آنتی-بادی های ضد نئوسپورا کانینوم در گاو و گاومیش به روش الایزا

نئوسپورا کانینوم تک یاخته ای از شاخه اپی کمپلکسا بوده و طیف وسیعی از حیوانات خونگرم را آلوده می کند و عامل مهم سقط در گاو می باشد. آنتی ژن گرانول متراکم 7(ncgra7) یک پروتئین ایمونودامینانت مهم و قابل اعتماد در تشخیص نئوسپوروزیس در گاو می باشد. هدف از تحقیق حاضر، تولید آنتی ژن نوترکیب ncgra7 و استفاده از آن در تدوین آزمایش الایزا و مقایسه ارزش تشخیصی آن با کیت تجاری الایزا می باشد. بدین منظور قطعه ای از dna انگل مربوط به gra7 با استفاده از آزمون pcr تکثیر یافت. پس از تأیید ردیف نوکلئوتید ی محصول pcr در پلاسمید pmal-c2xکلون و پروتئین در باکتری e.coli سویه tg1 بیان و با وسترن بلات تأیید شد. پس از خالص سازی پروتئین نوترکیب ncgra7 با استفاده از رزین آمیلوز و تعیین غلظت پروتئین نوترکیب، آزمایش الایزا با استفاده از آنتی ژن نوترکیب ncgra7 جهت تشخیص آنتی بادی ضد نئوسپورا کانینوم برای سرم های گاو و گاومیش طراحی گردید. تیتر آنتی بادی 108 سرم گاو و 122 سرم گاومیش با استفاده از الایزا های استاندارد شده با ncgra7 و کیت تجاری الایزای(idexx) تعیین گردید. حساسیت و ویژگی این تست برای الایزا های طراحی شده با ncgra7 برای سرم های گاومیش به ترتیب90 و 97 درصد و برای سرم های گاو به ترتیب 91 و 94 درصد بود. شیوع سرمی نئوسپورا کانینوم در 108 نمونه سرم های گاو جمع آوری شده از اطراف اهواز در کیت الایزای تجاری idexx ، 70/53 درصد و در الایزای طراحی شده ncgra7، 85/51 درصد بود و در 122 نمونه سرمی گاومیش در کیت الایزای تجاری idexx و الایزای طراحی شده با ncgra7 به ترتیب 55/56 و 37/57 درصد بود. اختلاف معنی داری بین دو تست کیت الایزای تجاری idexx و الایزای طراحی شده با ncgra7 مشاهده نشد (05/0> p). درجه تطابق تقریباً کاملی بین نتایج دو تست در الایزا های طراحی شده برای گاو و گاومیش وجود داشت. آماره کاپا در الایزای طراحی شده برای سرم های گاو 85/0 و در الایزای طراحی شده برای سرم های گاومیش83/0 بود (001/0> p). نتایج نشان داد که الایزای طراحی شده بر اساس آنتی ژن نوترکیب ncgra7 تستی قابل اعتماد برای تشخیص آنتی بادی اختصاصی در آلودگی نئوسپورا کانینوم تحت شرایط مزرعه به نظر می رسد.